Although the extensive use of cell spheroids in various fields, cellular heterogeneity by insufficient diffusion of oxygen/nutrients and accumulation of metabolic wastes remains as a challenge. Herein, we developed a cell spheroid system containing porous polycaprolactone (PCL) microparticles. The PCL microparticles with leaf-stacked structure (LSS microparticles) were fabricated using a heating-cooling technique. Cells and LSS microparticles suspension were seeded into agarose-based micro-concave array to prepare Cell/LSS microparticle (Cell/LSS) spheroids with a size of about 500 μm. On the basis of in vitro cell culture, it was recognized that the LSS microparticles uniformly distributed in Cell/LSS spheroids can be micro-channel networks for sufficient supply of medium including oxygen/nutrients and removal of metabolic wastes, and thus prevent cellular heterogeneity in spheroids. Therefore, we suggest that the Cell/LSS spheroid system may be an alternative technique to overcome the limitations of conventional cell spheroids as well as promising platform system for various studies.

본 연구에서는 다공성의 낙엽적층구조 미세입자와 세포로 구성된 세포 스페로이드 시스템을 제조하였다. 본 연구팀이 고안한, 고분자 용액의 단순 가열-냉각 과정을 통해 낙엽적층구조를 가지는 다공성 미세입자를 제조하였고, 세포와 낙엽적층구조 미세입자 혼합 용액을 아가로스 기반의 micro-concave array에 분주하여 약 500 μm의 크기를 가지는 세포/미세입자 스페로이드를 제조하였다. In vitro 세포 실험을 통해, 세포/미세입자 스페로이드 형성을 위한 최적의 비율로 세포와 미세입자가 9/1(개수비)로 혼합된 군이 선정되었으며, 스페로이드 내부에 포함된 낙엽적층구조 미세입자는 산소와 자양분을 포함한 세포 배양액의 공급 및 세포 대사물질들의 배출을 위한 micro-channel networks로의 역할을 통해 스페로이드의 불균일한 세포 구성을 억제할 수 있는, 즉 기존 세포 스페로이드의 한계를 극복할 수 있는 하나의 해결책이 될 수 있음을 확인하였다.

Keywords: cell spheroid, microparticle, tissue engineering, tissue regeneration, leaf-stacked structure.